通过高密度工作细胞库和N-1灌流工艺实现降本增效

赛孚士生产中心近日成功采用高密度工作细胞库结合灌流工艺制备高密度种子细胞完成2000L规模细胞培养工艺的重现，在不影响细胞倍增水平（Population Doubling Level，PDL）的前提下大大缩短工艺时间，提高车间设备、设施的利用率。高密度工作细胞库细胞密度超过100×10⁶cells/ml，优化的冻存方法可确保高密度工作细胞库细胞复苏后活率同常规工作细胞库（约10×10⁶cells/ml）一致。复苏一定数量的高密度冻存细胞后可直接接种至WAVE生物反应器中进行培养；在WAVE生物反应器中采用灌流培养工艺制备细胞密度＞25×10⁶cells/ml的高密度种子细胞，可直接接种至2000L生物反应器中。采用上述策略可大大简化工艺、减少硬件的投入；减少种子阶段培养基用量；缩短种子扩增工序时间，如2000L规模种子扩增阶段时间可从常规约20天缩短至仅10天。同时可保证种子细胞倍增水平和常规工艺基本一致，细胞稳定性得以保障（表1）。

（表1）

工作细胞库以及种子细胞扩增工艺的变更可能影响到细胞的生长以及目标抗体的表达。分析本批次高密度工作细胞库生产各工艺参数，该项目从常规工作细胞库变更为高密度工作细胞库后细胞生长、目标抗体产量均维持一致，细胞培养工艺得以重现。

图1.常规工作细胞库和高密度工作细胞库对生长影响

图2.常规工作细胞库和高密度工作细胞库对产量、质量的影响

综上，应用高密度工作细胞库结合灌流工艺制备种子细胞后，工艺大大简化，生产时间大大缩短，同时细胞倍增水平、细胞生长以及目标抗体表达（产量、质量）均和原采用常规工作细胞库的工艺一致。